Ақпарат

ДНҚ-целлюлоза хроматографиясы дегеніміз не?

ДНҚ-целлюлоза хроматографиясы дегеніміз не?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Мен ақуыз мен ДНҚ арасындағы өзара әрекеттесуді зерттеу үшін ДНҚ-целлюлоза хроматографиясын жасаған қағазды оқып жатырмын. Олар ақуызды бағанға қосады және тұздың жоғары концентрациясымен элюциялайды.


ДНҚ-целлюлоза хроматографиясы ДНҚ-ны байланыстыратын ақуыздарды тазарту үшін қолданылады (Потузак пен Дин 1978, Абдулла және т.б., 1985).

Мұның идеясы өте қарапайым: сіз ДНҚ -ны целлюлоза матрицасына бекітіп, ДНҚ целлюлозадан бөлінбеуі үшін шарттарды сақтайсыз. Содан кейін бұл стационарлық фаза жылжымалы фазадан ДНҚ байланыстыратын ақуыздарға жем ретінде қолданылады. Тазартылған ДНҚ байланыстыратын ақуыздар кейіннен тұздың жоғары концентрациясы бар колонкадан диссоциациялануы мүмкін.

Бұл әдісті (менің білуімше) бірінші рет Литнам (1968) сипаттаған, ол оны ДНҚ полимеразасын алу үшін қолданған Micrococcus luteus.


ДНҚ репликациясы және репарациясы, ДНҚ рекомбинациясы, селективті ген экспрессиясы және мРНҚ транскрипциясы сияқты негізгі генетикалық процестерді мүмкін ету үшін ақуыздардың қызықты әртүрлілігі жасуша ішіндегі ДНҚ-мен өзара әрекеттесуі керек. Геннің функциясын молекулалық деңгейде нақты анықтамас бұрын, ДНҚ-мен байланысты көптеген ақуыздарды жеке оқшаулап, сипаттау қажет болады. Біз осындай талдауды жеңілдететін жалпы әдіс жасадық. Біз «ДНҚ-целлюлоза хроматографиясы» деп атайтын бұл әдіс жасуша ішінде ДНҚ-да қызмет ететін көптеген ақуыздардың in vitro физиологиялық иондық күштерде ДНҚ-мен тығыз байланысатындығына негізделген. Тұздың жоғары концентрацияларында бұл белоктар ДНҚ-дан қайтымды түрде, шамасы, зақымданбаған күйде шығарылады. Байланыстырушы қасиеттері бар бұрын сипатталған ақуыздарға мыналар жатады E. coli РНҚ полимераза (Дж. Р. Ричардсон, 1966b Петтижон және Камия, 1967) және лактоза мен фаг λ репрессорлары (Гилберт және Мюллер-Хилл, 1967).

↵ * Бұл жұмыс біздің біріміз (B. M. A.) Institut de Biologie Moleculaire институтында (1965-1966) Ұлттық ғылыми қорының постдокторлық стипендиатын өткізген кезде басталды, Женева, Швейцария. Алдын ала есеп жарияланды (Альбертс, 1968).


ДНҚ аффинділігі ретін реттейтін хроматография: рестрикциялық эндонуклеазаларды бөліп алу үшін топқа тән адсорбентті қолдану

Рестрикциялық эндонуклеазаларды бөліп алу үшін ДНҚ-ның аффинділік адсорбенттерін реттілікпен қолдану ЭкоRI және SphМен біртектілік туралы хабарлады. Алайда, бұл адсорбенттердің жоғары бағасы оларды кеңірек қолдану үшін шектеу факторы болып табылады. Бұл құжат рестрикциялық эндонуклеазаларды оқшаулауда 34 рестрикциялық эндонуклеазалар тобына тән лигандтарды тану тізбегін қамтитын дәйектілікке тән ДНҚ аффинді лигандтарын қолдану туралы хабарлайды. Алты шектеу эндонуклеазаларының шикі үлгілері, атап айтқанда BshFI, БамСәлем, СмаМен, ҚапII, PvuII және СалI, осы адсорбенттермен байланысатыны және әртүрлі KCl концентрацияларында элюциялануы мүмкін екендігі көрсетілді. Жоғары тазарту факторлары мен қалпына келтіру алынды. Рестрикциялық эндонуклеаза BshFI, изошизомер ХэІІІ, микроорганизмнен Bacillus sphaericus ДНҚ-целлюлоза хроматографиясы мен олигонуклеотид-лигандтық аффиниттік хроматографияны қамтитын екі сатылы процедураны қолдана отырып, біртектілікке дейін тазартылды. Фермент натрий додецил сульфаты-полиакриламидті гель электрофорезімен де, өлшемді қоспайтын хроматографиямен де анықталатын салыстырмалы молекулалық массасы 34 000 болатын мономер түрінде болады.


Бактериофаг T7 индукциялаған ДНҚ-байланыстыратын ақуыз

ДНҚ-байланыстырушы ақуыз тазартылды Ішек таяқшасы бактериофаг T7 ДНҚ-целлюлоза хроматографиясымен жұқтырған. Ақуыз инфекцияланбаған жасушаларда болмайды. Тазартылған ақуыздың молекулалық салмағы 31 000 және бір тізбекті ДНҚ-мен күшті және артықшылықты байланысады. In vitro зерттеулер бұл ақуыз полимераза бір тізбекті үлгіні тиімді пайдалана алмайтын жағдайларда T7-индукцияланған ДНҚ полимеразамен катализделген полимерлену жылдамдығын 10-15 есе ынталандыра алатынын көрсетеді. Стимуляция дәрежесі ақуыздың ДНҚ үлгісіне қатынасына байланысты және полимеразаның концентрациясына тәуелсіз.

Байқалған ынталандыру T7 ДНҚ полимеразасына тән, себебі катализденетін реакцияларға ақуыз қосылады E. coli I, II немесе III немесе T4 ДНҚ полимеразалары әсер етпейді.


Егеуқұйрық остеогенді саркомасының жасушалық линияларында 1,25-дигидроксивитамин D3 рецепторға ұқсас макромолекуласы

D3 дәруменінің гормональды метаболиті, 1,25-дигидроксивитамин D3 (1,25 (OH) 2D3) өзінің биологиялық әсерін бастапқыда цитозолды рецепторлық ақуызға байланыстыру арқылы көрсетеді. Мұндай ақуыз D3 витаминінің мақсатты мүшелерінде, соның ішінде сүйекте көрсетілген. Қалыпты сүйекте 1,25 (OH) 2D3 рөлі қалыпты сүйекте кеңінен зерттелсе де, оның әсер етуі туралы, егер бар болса, сүйектің қалыптан тыс өсуіне әсері туралы ештеңе белгісіз. Егеуқұйрықтың остеогендік саркомасы сүйек қатерлі ісігінің пайдалы үлгісі болып табылады. Ісік жасушалары дифференциалданған функцияларды сақтайды, соның ішінде сүйек түзу және паратироид гормонына, простагландиндерге және аз дәрежеде кальцитонинге циклдік АМФ деңгейінің жоғарылауына жауап беру қабілеті. Біз мұнда 1,25(OH)2D3 рецепторының болуы үшін остеогендік саркоманың жасушалық желілерін бағаладық. Біз сахароза градиентінің тұндыруын, қанықтыру талдауын және ДНҚ-целлюлоза хроматографиясын қолдандық. Бұл жасушалық желілерден алынған цитозол препараттарында 3,3 S қаныққан макромолекула бар, ол 1,25 (OH) 2D3 байланыстырады және спецификалық және жоғары аффинділікпен байланысады (Kd = 2 x 10 (-10) M). Стерин-макромолекула кешені ДНҚ-целлюлозамен байланысады және оның аффинирленген шайырдан оның элюциялық профилі қалыпты егеуқұйрық сүйегінен алынған 1,25 (OH) 2D3 рецепторына ұқсас. Бұл ісік жасушалары сүйекте 1,25 (OH) 2D3 әсерін және сүйек қатерлі ісігі биологиясындағы осы метаболиттің рөлін зерттеу үшін пайдалы модель болуы керек.


А.С. Садықов, Ф. И. Ершов және т.б., Интерферон индукторлары [орыс тілінде], Ташкент (1978).

Ф.И.Ершов және А.С.Новохатский, Интерферон және оның индукторлары [орыс тілінде], Мәскеу (1981).

В.Д.Соловьев және Т.А.Бектеміров, Интерферон медицина теориясы мен тәжірибесінде [орыс тілінде], Мәскеу (1970).

К.Кантелл мен С.Хирвонен, Дж. Генерал Вирол.,39, 541 (1978).

К.Берг және И.Херон, Сканд. J. Immunol.,11, 489 (1980).

М.Рубенштейн және т.б., Ғылым,202, 1289 (1978).

K. C. Zoon, M. E. Smith және т.б., Proc. Натл. Акад. Ғылым. АҚШ,76, No11, 5601 (1979).

Р.Г.Парсонс, П.Х.Алдендерфер және Р.Ковал, Дж. Қатерлі ісік институты,63, No 1, 43 (1979).


Chrysemys picta тұщы су тасбақасының жұмыртқа жолындағы екі прогестерон рецепторлары: сүтқоректілер мен құстардың прогестерон рецепторлық жүйелеріне ықтимал гомология

Тұщы су тасбақасының Chrysemys picta жұмыртқа жолындағы екі прогестерон рецепторлары: сүтқоректілер мен құстардың рецепторлық жүйелеріне гомология болуы мүмкін. Мұнда біз тасбақа түтікшесінің ядролық сығындыларындағы прогестеронның екі нақты рецепторының сипаттамасы туралы айтамыз. Рецепторлар диссоциациялану тұрақтылығымен ерекшеленеді (2,8 нМ және 27 нМ), оларды DEAE-сефарозада бөлуге болады, біріншісі 0,08 М KCl, екіншісі 0,20 М KCl. [3H]R5020 фотоапфинитті таңбалау SDS-PAGE 2,8 нМ бөліктің көрінетін молекулалық салмағы 80 +/- 5 кДа және 27 нМ бөлігі 120 +/- 5 кДа көрінетін молекулалық массамен көшетінін көрсетті. Бұл рецепторлар PR-A және PR-B деп аталады, олардың молекулалық массасы мен элюция профиліне байланысты. ДНҚ-целлюлозаның хроматографиялық зерттеулері екеуі де ДНҚ-целлюлозаны 0,09 М NaCl элюциясы бар PR-A және 0,20-0,21 М NaCl аралығындағы PR-B элюциясымен байланыстыратынын көрсетеді. Репродуктивті белсенді емес тасбақаларда (қаңтар мен ақпан айларынан бастап) эстрадиол анықталмайды, ал Scatchard анализі, [3H] R5020 фотофафинділік таңбасы электрофоретикалық зерттеулермен және DEAE-Сефароза мен ДНҚ-целлюлоза хроматографиясымен анықталғандай PR-B жоқ. Бұл жануарларда PR-B эстрогенді емдеумен толықтырылуы мүмкін, бұл PR-A және PR-B үшін де физиологиялық рөлді және PR-B эстрадиолға тәуелділігін көрсетеді.


Алтын балық миындағы андрогендік рецепторлардың көптігі: сипаттамалары және маусымдық өзгерістер

Тестостерон (Т) миға тікелей андрогендік рецепторлар арқылы немесе эстрадиолға ароматизациядан кейін эстроген рецепторлары арқылы әсер етеді. Телостост балықтарындағы мидың ароматазасының белсенділігі сүтқоректілерге қарағанда 100-1000 есе жоғары және рецепторларды байланыстыруға болатын андроген мөлшерін едәуір төмендетеді деп күтілуде. Андроген рецепторларының телеостостың миында бар -жоғын және олардың физикалық -химиялық қасиеттері ароматазаның жоғарылағанын көрсететінін анықтау үшін Carassius auratus алтын балықына эксперименттер жүргізілді. Цитозолдық және ядролық сығындылар байланыстырылған және бос стероидтерді бөлу үшін [3H] T мен көмір, Sephadex LH-20 немесе ДНҚ-целлюлоза хроматографиясын қолдану арқылы талданды. Байланыстыру белсенділігі қаныққан және T және 5 альфа-дигидротестостеронға бірдей жоғары ұқсастыққа ие болды (Kd, шамамен 2,4 X 10(-9) М). Миболерон салыстырмалы түрде әлсіз бәсекелес болса да, 11-кетотестостерон андрогені, метилтриенолон (R1881), эстрадиол, прогестерон және кортизол деген болжамды телостостоген нашар лигандтар болды. Бұл рецепторды алтын балық сарысуындағы стероидты байланыстыратын ақуыздан ерекшелендіретін сипаттамалар ядролық және цитозолдық сығындыларда байланыстыру белсенділігінің болуы, лиганд-рецепторлардың диссоциациясының төмен жылдамдығы, электрофоретикалық қозғалғыштығы, төмен және жоғары тұзда тұндыру қасиеттері және ұлпа болып табылады. таралуы (алдыңғы мидың артқы миынан үлкен немесе гипофизге тең). ДНҚ целлюлозасын жабыстыратын және жабыспайтын формалар анықталды, бірақ олар өлшенген басқа айнымалыларда ерекшеленбеді. Алтын балық андроген рецепторлары барлық маңызды физикалық-химиялық сипаттамалары бойынша сүтқоректілерге ұқсас болғанымен, олар егеуқұйрық миының деңгейімен салыстырғанда өте көп мөлшерде (5-68 пмоль/г тін), бірақ простата мен басқа да еркек жыныс гормонының мақсатты мүшелерінің деңгейімен салыстырылады. Сонымен қатар, жалпы рецепторлардың маусымдық өзгерістері болды, олардың уылдырық шашуының шыңы (сәуір) репродуктивті емес балықтардың (шілде/тамыз) көрсеткіштерінен 4-5 есе жоғары. Бұл уақытша үлгі мен өзгерістің шамасы мидың ароматазасындағы бұрын хабарланған өзгерістерге сәйкес келді. Осылайша, филогенетикалық және физиологиялық корреляция андроген рецепторлары мен мидағы ароматаза арасындағы функционалды өзара тәуелділікті көрсетеді. Алтын балықтағы бұл зерттеулер ми мен андроген рецепторларының ұзақ эволюциялық тарихқа ие екендігін және омыртқалылар сериясы арқылы жоғары сақталғанын көрсетеді.


ДНҚ примазасының тазартылуы және қасиеттері Никотианатабакум

Темекі жапырағындағы ядролық фракциядан ДНҚ-праймаза бөлініп алынды (Nicotiana tabacum L. cv. Самсун) және темекі суспензиясының культура жасушаларынан дайындалған тазартылған ядролардан. ДНҚ примазасы аммоний сульфатын фракциялау арқылы жапырақтардан дайындық үшін біртектілікке (i) дейін тазартылды, содан кейін фосфоцеллюлоза, Q-сефароз, гепарин-сефароза және бір тізбекті ДНҚ целлюлозасы бағаналарында хроматография және глицерин градиентінде шөгу, (ii) жасушалардан дайындық үшін, бір тізбекті ДНҚ целлюлозасында хроматография, содан кейін аммоний сульфаты тұнбасы және жоғары Q, гепарин-сефароз және моно Q бағандарында хроматография. Глицерин градиенттерінде ДНҚ примазасы сәйкес жылдамдықта шөгеді. молекулалық массасы шамамен 120 кДа. SDS-полиакриламидті гель электрофорезінде примаза 63 кДа және 53 кДа полипептидтік екі суббірлікке бөлінді, олар мөлшері бойынша жануарлар мен ашытқы ДНҚ полимераза α-примаза комплекстерінің примаза суббірліктеріне ұқсас. Поли (dT) немесе фаг M13 бір тізбекті ДНҚ шаблондарында ДНҚ примазасы ұзындығы 20 нуклеотидке дейін олигорибонуклеотидтердің синтезін катализдейді, олар ДНҚ синтезінің праймері бола алады. Ішек таяқшасы ДНҚ полимераза. Примазаның белсенділігі шаблонға, магний иондарына және АТФ-ке тәуелді болды, ол афидиколин мен рифампицинге төзімді болды, бірақ N-этилмалимидпен қатты тежелді. Бұл өсімдік ДНҚ примазасының біртектілігіне дейін тазарту туралы алғашқы есеп.

Бұл жазылу мазмұнының алдын ала қаралуы, сіздің мекеме арқылы кіру.


Жүйелік қызыл эритематоз: молекулалық клондау және рекомбинантты DNase моноклоналды κ жеңіл тізбекті NGK-1 талдау

DNase антиденелері цитотоксикалық болғандықтан, ядроға енеді және апоптоз арқылы жасуша өлімін индукциялайтын ДНҚ фрагментациясын тудырады, олар әртүрлі аутоиммундық патологиялардың және әсіресе жүйелі қызыл жегінің (SLE) патогенезінде маңызды рөл атқара алады. Каталитикалық антиденелерді зерттеудің қызықты мақсаты осындай антиденелердің ықтимал биологиялық рөлін зерттеу ғана емес, сонымен қатар абзимдер ұсынатын артықшылықтарды пайдаланатын болашақта адам мен жануарлардың жаңа терапиясын жасау болып табылады. SLE науқастарының иммуноглобулинді жеңіл тізбекті кітапханасы фагемидті векторға клондалды. ДНҚ-ны байланыстыруға қабілетті рекомбинантты моноклоналды антидене жарық тізбектерін (MLChs) көрсететін фаг бөлшектері ДНҚ-целлюлозаға аффиниттік хроматография әдісімен бөлінді. 46 MLChs-тың 16-ы тиімді гидролизденген ДНҚ бір MLCh (шамамен 27-28kDa) ішек таяқшасында шығарылды және металды хелаттау мен гельді сүзу арқылы тазартылды. MLCh NGK-1 электрофоретикалық біртекті болды және батыс блоттаудан кейін адам антиденелерінің жеңіл тізбектеріне қарсы тышқан IgG-лерімен оң жауап көрсетті. Құрамында ДНҚ бар гельдегі SDS-PAGE MLCh ДНҚ-ны гидролиздейтінін және канондық DNase-мен ластанбағанын көрсетті. DNase MLCh бірнеше металл иондарының көмегімен белсендірілді. DNase MLCh ақуыздық тізбегі сүтқоректілердің DNases I -мен гомологияға ие және олармен ДНҚ гидролизі мен Mg (2+) мен Са байланысуы үшін қажет бірнеше бірдей немесе ұқсас (бүйірлік тізбектің қызметі бірдей) маңызды амин қышқылдарының қалдықтарымен бөліседі. (2+) иондар. MLCh (K (M) = 0,3 микроМ) бірінші мысалына ДНҚ-ның аффиниясы адам DNase I-ге қарағанда 150-200 есе жоғары болды.

Кілт сөздер: Сүтқоректілердің DNases I рекомбинантты моноклоналды жеңіл тізбекті жүйелі қызыл жегімен DNase белсенділігінің гомологиясы.


Тадпол коллагеназасының зимогені

Мақалаларды көру саны – 2008 жылдың қарашасынан бастап (PDF және HTML) барлық мекемелер мен жеке тұлғалардағы толық мәтіндік мақала жүктеп алуларының ҚАРСЫ сәйкес келетін сомасы. Бұл көрсеткіштер соңғы бірнеше күндегі тұтынуды көрсету үшін үнемі жаңартылып отырады.

Дәйексөздер - бұл Crossref есептеген және күн сайын жаңартылатын осы мақалаға сілтеме жасайтын басқа мақалалардың саны. Crossref дәйексөздер саны туралы қосымша ақпаратты табыңыз.

Altmetric Attention Score - бұл зерттеу мақаласы желіде алынған назардың сандық өлшемі. Дөңгелек белгішесін басу altmetric.com сайтында берілген мақаланың ұпайы мен әлеуметтік медиа болуы туралы қосымша мәліметтері бар бетті жүктейді. Altmetric Attention Score ұпайы және балл қалай есептелетіні туралы қосымша ақпаратты табыңыз.

Ескерту: Аннотацияның орнына бұл мақаланың бірінші беті.


Бейнені қараңыз: ДНҚ, гендер және хромосомалар, олардың құрылымы (Қазан 2022).